Comparative fecal steroid profile during pregnancy, parturition, and lactation between natural fertilization and embryo transfer in ocelots (Leopardus pardalis).

Despite the invaluable role that assisted reproduction technologies (ARTs) play in conservation, pregnancy and parturition rates by embryo transfer (ET) are low for most endangered felids. Thus, efforts to expand the knowledge on pregnancy biology and ET are still required. In this context, we examined fecal sex steroid metabolites (i.e., estrogens, glucocorticoids, and progestogens) of eight ocelots submitted to natural fertilization (NF) and ET in 22 pregnancies (19 NF and 3 ET). Fecal samples were collected and assessed for each pregnancy from estrous cycle, pregnancy, and lactation, totaling 155 days. In short, progestogen levels remained high and unchanged (P < 0.05) from conception until parturition for females maintained under NF. On the other hand, females submitted to ET exhibited changes (P > 0.05) in progestogen levels from conception until parturition, with a significant decrease during pregnancy (480.72 ng/day; r2 = 0.81; P < 0.0001). Significant changes between NF and ET also were noted in estrogen levels between the first and last thirds of pregnancy (P < 0.05), in which estrogen levels exhibited a negative correlation (P < 0.01) between themselves. Regarding glucocorticoids, significant changes (P < 0.01) were observed only in the first third of pregnancy between NF and ET, which we believe may be related to the handling for ovarian synchronization and ET. Besides hormonal changes, the pregnancy was more prolonged (2.5 days) and more prone to dystocia in ET than NF. Overall, 24 embryos were transferred into eight females (3/1), with three kittens being born from three distinct deliveries (i.e., 12.5% of embryos and 37.5% of females). Our findings have supported the great potential of production and transfer of long-term frozen embryos in ocelot conservation. However, they reveal possible effects of these biotechnologies on hormonal levels during pregnancy linked with low conception and parturition rates and dystocic cases in felids.

Efeito da adição de glutationa na função e estresse oxidativo em sêmen ovino criopreservado / Effect of glutathione on the function and oxidative status of ovine cryopreserved sperm

Os ácidos graxos poli-insaturados garantem fluidez à membrana plasmática do espermatozoide. No entanto, as duplas ligações presentes, os tornam mais susceptíveis aos efeitos nocivos da peroxidação lipídica. A adição do antioxidante Glutationa reduzida (GSH) poderia conferir proteção aos espermatozoides de ovinos submetidos à congelação contra os graves danos causados pelo estresse oxidativo. O objetivo do presente experimento foi avaliar se a GSH protege os espermatozoides ovinos criopreservados contra danos causados pelo estresse oxidativo. Foram colhidos ejaculados de quatro carneiros adultos. As análises convencionais foram: concentração, motilidade, vigor e morfologia. As análises funcionais foram: integridade de membrana, integridade acrossomal, integridade de cromatina e atividade mitocondrial. O sêmen foi criopreservado utilizando o diluidor Tris-gema-critrato, suplementado com GSH (controle, 1, 5 e 10 mM). As amostras foram submetidas ao protocolo de peroxidação lipídica induzida e subsequente quantificação das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As análises estatísticas foram realizadas utilizando o Sistema SAS para Windows. Não houve efeito do tratamento com GSH sobre as variáveis avaliadas pelos testes convencionais. A GSH diminuiu a proporção de acrossomas íntegros. Amostras tratadas com 5mM de GSH apresentaram menor percentual de células com membranas íntegras quando comparadas às amostras controle e aquelas tratadas com 10 mM; o percentual de células sem atividade mitocondrial foi influenciado pela GSH e também não houve efeito nas TBARS. As amostras do grupo controle foram mais susceptíveis à denaturação da cromatina. Em conclusão, a adição do antioxidante Glutationa reduzida confere proteção ao DNA e à atividade mitocondrial de espermatozoides de ovinos.

The high susceptibility of sperm to the oxidative stress occurs especially due to high content of poly-unsaturated fatty acids (PUFAs) in its plasma membrane. The PUFAs provide the necessary fluidity to the plasma membrane. However double bonds present in those fatty acids are more susceptible to oxidative stress. Studies in human indicate that cryopreservation may lead to damages to the sperm due to oxidative stress. This study aimed to verify if the antioxidant glutathione (GSH) may protect ovine cryopreserved sperm against damages caused by oxidative stress. Semen samples of four rams were cryopreserved using Tris-egg yolk extender supplemented with different concentrations of reduced glutathione (control, 1, 5 and 10 mM). After thawing, samples were evaluated using conventional (motility and vigor) and functional tests (membrane integrity and mitochondrial activity). Aliquots of each thawed sample were submitted to protocol of induced lipid peroxidation using ascorbate (20 mM) and ferrous sulphate (4 mM), with further measurement of tiobarbituric acid reactive substances (TBARS), index of oxidative stress. No effect of GSH was observed on variables assessed by conventional tests. GSH decreased the proportion of intact acrosomes. Samples treated with 5 mM GSH showed lower percentage of intact membrane cells when compared to control samples and those treated with 10 mM. The percentage of cells with mitochondrial activity was affected by GSH, but no effect on TBARS. Samples from control group were more susceptible to denaturation of chromatin. In conclusion, the addition of Glutathione (GSH) offers protection to DNA and mitochondrial activity of ovine sperm.

Análise espermática de perdizes (Rhynchotus rufescens) criadas em cativeiro e suplementadas com selênio / Semen evaluation of captive male red-winged tinamous (Rhynchotus rufescens) supplemented with selenium

Considerando a importância comercial da perdiz (Rhynchotus rufescens), implantaram-se algumas biotecnologias reprodutivas. Trinta animais, provenientes da FCAV-UNESP/Jaboticabal (2007-2008), foram aleatoriamente distribuídos em grupos: controle (sem selênio orgânico) e tratamento (com 0,2 a 0,8 mg de selênio em 1000 kg de ração ). Coletou-se sêmen por excitação manual, que foi aliquotado em pools com 150 μL. Mensuraram-se volume, motilidade, vigor, número de espermatozoides, concentração e morfologia espermáticas. Diluíram-se 20 μl de sêmen em 300 μl de solução fisiológica para testes complementares (Integridade das membranas acrossomal e plasmática). Contaram-se 200 células, por teste, e classificaram-nas: 1) Acrossomo Íntegro: cor lilás e Não-Íntegro: róseo; 2) Células Vivas (não coradas) e Mortas (coradas). Os dados foram analisados pelo SAS, System for Windows. Os resultados dos pools com e sem selênio foram: as variáveis volume, motilidade, vigor, número de espermatozoides, concentração, integridade acrossomal e integridade da membrana plasmática não apresentaram resultados significantes, porém encontrou-se uma menor porcentagem de espermatozoides com peça intermediária fortemente dobrada, nos animais tratados com selênio em relação aos não tratados (1,33 ± 0,53 vs. 3,78 ± 0,69, respectivamente; p = 0.0107). De fato, sabe-se que o selênio tem papel importante na estrutura dos espermatozoides20. A deficiência de selênio está associada com danos na arquitetura da peça intermediária do espermatozóide.

Due to the commercial importance of the red-winged tinamou (Rhynchotus rufescens), for the past few years, the employment of reproductive biotechnologies has been attempted. Thirty animals were randomly assigned into two groups: control group (no selenium) and treatment group (supplemented with 0,2 a 0,8 mg selenium/ 1000 kg ration). Animals were allocated at the FCAV – UNESP/Jaboticabal (2007-2008). Semen collections were performed by digital manipulation and divided in pools of at least 150 μL. After the immediate evaluation of motility, vigour, concentration and morphology, an aliquot of 20 μL was diluted in 300 μL of physiologic solution in order to test acrosome and membrane integrities, which were performed by counting 200 cells for each test. Cells were evaluated as follows: 1) Intact acrosome: lilac acrosome; Non-intact acrosome: pink acrosome; 2) Live cells: non stained; Dead: stained. Data was statistically analysed using the SAS System for Windows. No differences were found between treatment and control groups for volume, motility, vigour, mean number of spermatozoa per animal, concentration, Intact acrosome, Intact membrane. The difference found on midpiece sperm defect (Se = 1,33 ± 0,53 and control = 3,78 ± 0,69, p = 0.0107) may be due to the damages caused by the selenium deficiency to the architecture of the midpiece, which compromises sperm mobility and fertilization capacity.

Análise citogenética de oócitos de jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) coletados após estimulação ovariana / Cytogenetic analyses of ocelot (Leopardus pardalis) and tigrinus (Leopardus tigrinus) oocytes collected after ovarian stimulation

Este estudo representa a primeira avaliação da maturação nuclear de oócitos por análise citogenética realizada em duas espécies de felídeos brasileiros ameaçados de extinção: L. pardalis (n=5) e L. tigrinus (n=4).Os animais foram submetidos à estimulação ovariana alternada come CG-hCG e pFSH-pLH a cada quatro meses pelo período de dois anos, perfazendo um total de 6 intervenções. Os oócitos foram recuperados por vídeo-laparoscopia, caracterizados quanto à morfologia e utilizados para determinação dos estágios do ciclo meiótico por análise citogenética e maturação pela caracterização de metáfase II. Dos 33 oócitos de jaguatirica avaliados 12% (n=4) apresentaram cromossomos condensados em seu interior e dos 11 oócitos de gato-do-mato-pequeno avaliados 36% (n=4)apresentaram cromossomos condensados em seu interior, no entanto,nenhum oócito encontrava-se em metáfase II. Avaliação morfológica dos oócitos mostrou as mesmas características encontradas em outros mamíferos. Comparando os tratamentos, não houve diferença significativa(p>0,05) no número total de estruturas ovarianas (folículos e corpos lúteos recentes) observadas em estimulações alternadas sucessivas, nas duas espécies estudadas. Também não houve diferença significativa em relação ao total de estruturas ovarianas encontradas em cada tratamento(5,7±1,2 eCG/hCG; 7,9±0,9 pFSH/pLH) para L. pardalis e (2,6±0,7eCG/hCG; 2,0±0,5 pFSH/pLH) para L. tigrinus. Apesar das limitações deste experimento e do número reduzido de oócitos avaliados podemos sugerir que a aspiração folicular após estimulação ovariana com eCG/hCG e pFSH/pLH alternadamente resulta na recuperação de oócitos imaturos, que necessitam de cultivo em meios específicos para atingir o estágio de Metáfase II.

This study represents the first assessment of oocyte’s nuclear maturation by cytogenetical analysis in two endangered Brazilian felids:L. pardalis (n=5) and L. tigrinus (n=4). Females were treated 6 times with alternating eCG/hCG and pFSH/pLH protocols using an interval of 4 months between each treatment. Ovarian follicular development and oocytes recovery were performed through laparoscopy. Recovered oocytes were submitted to the morphological and cytogenetical analysis in order to evaluate the meiotic cycle and maturation (metaphase II), respectively. In 33 ocelot’s oocytes observed 12% (n=4) showed condensed chromosomes and in 11 tigrinu’s oocytes observed 36% (n=4) showed condensed chromosomes. However no oocytes in metaphase II were observed.O ocytes morphological evaluation showed the same characteristics were observed in others mammals. Our results suggest that L. pardalis and L. tigrinus do not show a decrease (p>0.05) in ovarian response after repeated and alternate exposure to different gonadotropin treatments. In both L. pardalis and L. tigrinus, no differences (p>0.05)were found regarding to the number of total ovarian structures (total follicles and CL) during successive gonadotropin treatments. There were no differences (p>0.05) regarding to the total number of ovarian structures in L. pardalis (5.7 ± 1.2 eCG/hCG and 7.9 ± 0.9 pFSH/pLH) or L. tigrinus (2.6 ± 0.7 eCG/hCG and 2.0 ± 0.5 pFSH/pLH).With these results we can suggest that follicular aspiration after ovarian stimulation with exogenous gonadotrophins results in immature oocytes, needing in vitro culture in specific mediums for metaphase II stage was observed.

Validação de conjuntos diagnósticos comerciais para dosagem sérica de progesterona e estradiol em jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-matopequeno (Leopardus tigrinus / Progesterone and estradiol commercial kits validation in serum of ocelots (Leopardus pardalis) and tigrina (Leopardus tigrinus)

Este estudo teve como objetivo validar os conjuntos diagnósticos m comerciais DPC (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA), em fase sólida, para dosagem de progesterona e DSL (Diagnostic System Laboratories INC/USA), em fase líquida, para dosagem de estradiol, por radioimunoensaio, em soro de Leopardus pardalis (n=5)e Leopardus tigrinus (n=4), antes (15-30 dias) e após (24-28 horas) tratamento com gonadotropinas exógenas (hCG/ Novormon® eeCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® e pLH/Lutropin-V®). A concentração sérica para Leopardus pardalis variou 0,005 a 0,151ng/ml para estradiol e 0,15-37,22ng/ml para progesterona. A concentração sérica para Leopardus tigrinus variou 0,012-0,147ng/ml para estradiol e 0,06-34,09ng/ml para progesterona. A sensibilidade mínima detectada foi 0,004 ng/ml para progesterona e 0,00014ng/ml para estradiol. Para progesterona o coeficiente intra-ensaio baixo foi 2,58% e alto6,36%, já o coeficiente inter-ensaio baixo foi 0,67% e alto 5,55%. Para o estradiol o coeficiente intra-ensaio baixo foi 0,69% e alto 4,15%,sendo o coeficiente inter-ensaio baixo 1,40% e alto 3,00%. Paralelismo foi encontrado para progesterona e conjunto comercial DPC com r = 0,96 para Leopardus pardalis e r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Para estradiol em conjunto comercial DSL paralelismo foi encontrado com r = 0,98 para Leopardus pardalis e com r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Com estes resultados podemos concluir que o conjunto diagnóstico comercial DPC para dosagem de progesterona e DSL para dosagem de estradiol foram validados para utilização em soro de Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus, podendo ser utilizado como ferramenta no manejo reprodutivo destas espécies visando à conservação.

DPC commercial kit (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA) and DSL commercial kit (Diagnostic System Laboratories INC/USA) were used for progesterone and estradiol radioimmunoassay validation in serum of two endangered Brazilian felids: Leopardus pardalis (n=5) and Leopardus tigrinus (n=4) before (15-30 days) and after (24-28 hours) exogenous gonadotrophins treatment(hCG/ Novormon® and eCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® andpLH/Lutropin-V®). Variation of estradiol concentration was 0.005 -0.151 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus pardalis. Variation of estradiol concentration was 0.012 -0.147 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus tigrinus. Minimum sensibility detected for progesterone was 0.004 ng/ml and for estradiol was 0.00014 ng/ml. Progesterone intra-assay coefficient was 2.58% and 6.36% and inter-assay was 0.67% and 5.55%. Estradiol intra-assay coefficient was 0.69% and 4.15%,and inter-assay was 1.40% and 3.00%. Parallelism was used for kits validation. Progesterone and DPC commercial kit Parallelism wasr = 0.96 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. Estradiol and DSL commercial kit Parallelism was r = 0.98 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. In conclusion, these results showed that DPC commercial kit for serum progesterone dosages and DSL commercial kit for serum estradiol dosages can be used for Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus. These findings are potentially valuable for the reproductive management and conservation of endangered felid populations.

Comparação de método para análise de metabólitos fecais de glicocorticóides em jaguatiricas (Leopardus pardalis) submetidas a tratamento hormonal e vídeo-laparoscopia / Comparison of methods fecal glucocorticoids metabolite analyses in ocelots (Leopardus pardalis) submited to hormonal treatment and video-laparoscopy

Dois metódos de extração de metabólitos fecais 32,33 e dois conjuntos comerciais (“ImmuChem Doubly Antibody Corticosterone 125I RIA”-ICN Biomedicals e “Coat-a-count Cortisol 125I RIE” - DPC) foram utilizados na mensuração dos metabólitos de glicocorticóides (cortisole corticosterona) em amostras de fezes de jaguatiricas (Leopardus pardalis) (n=3), antes e após tratamento hormonal e procedimentos de vídeo-laparoscopia. O objetivo desse estudo foi comparar e validar fisiologicamente os diferentes protocolos de extração e diferentes conjuntos comerciais na mensuração hormonal. Não houve diferença significativa com relação ao método de extração dos metabólitos. O conjunto comercial ICN Biomedicals provou ser melhor na detecção de metabólitos fecais de glicocorticóides em jaguatiricas.

The objective of this study was to compare two different fecal metabolites extraction protocols 32,33 and two commercial kits used to analyse fecal glucocorticoids (cortisol and corticosterone) in ocelots (Leopardus pardalis) submitted to hormonal treatment and video-laparoscopy procedure. Based on hormonal analyses, both extraction protocols exhibited similar performance. One commercial kit (ICN Biomedicals) had better results than another (DPC) on glucocorticoids metabolites evaluation.

Ovarian response to repeated administration of alternating exogenous gonadotropin regimens in the ocelot (Leopardus pardalis) and tigrinus (Leopardus tigrinus).

Exogenous gonadotropins are used to stimulate ovarian follicular growth and ovulation in mammalian species, including wild cats. However, successes in application of assisted reproduction techniques in nondomestic felids have been sparse. Our objectives were to assess the effectiveness of alternating gonadotropin regimens on ovarian responses. Five adult female ocelots and four adult female tigrinus were treated four to six times, using alternating eCG/hCG and pFSH/pLH at 4-month intervals. Laparoscopies were done to assess follicular development and to collect oocytes from matures follicles. The average number of follicles and corpus luteum (CL) per stimulation was higher in ocelots (7.0 +/- 0.8; mean +/- S.E.M.) than in tigrinus (2.5 +/- 0.4; P < 0.05), but the percentage of mature oocytes did not differ between the two species (mean range, 54-55%). Within species, both gonadotropin regimens were equally effective in inducing follicular growth and oocyte maturation. The total number of ovarian structures and oocyte maturation percentages did not decrease in either species with sequential stimulations. In summary, female ocelots and tigrinus continued to respond to repeated alternating ovarian stimulation protocols. In conclusion, the use of alternating gonadotropin regimens may permit more intensive reproductive management in these endangered cats.

Effect of insemination-to-induced ovulation interval on fertilization rate, embryo viability and number of accessory sperms in SOWS

The ideal interval between AI and ovulation (OV) is not well determined yet, varying from 12 to 28 h before up to 4 h after ovulation. Utilization of gonadotrophins to synchronize ovulation would allow the pre-determination of the groups' size, according to the AI-OV intervals, and would contribute to determine a secure interval between AI-Ov. 120 sows received 7.5 mg IM of Luprostiol, between days 12 and 17 of the estrous cycle, 600 lU of eCG 1M 24 h after prostaglandin and 5.0 mg of LH 1M 72 h after eCG injection. The moment of ovulation was diagnosed by transrectal ultrasonography at intervals of 6 h. There were 5 treatments according to IA-OV interval: T1- 48 to 36 h before OV; T2- 36 to 24 h before OV; T3- 24 to 12 h before OV; T4- 12 to 0h before OV and T5-0 to 12 h after Ov. Sows were slaughtered 96. 7±11.37 h after Ov. Recovery rate (RR), number of corpora lutea (NC), total number of structures (ST), fertilization rate (FR), embryo viability (EV) and number of accessory sperm (AS) were analyzed. The synchronization protocol showed an homogenous distribution of the animaIs among treatments (LH-OV interval 39.22±7.6h), and it didn't influenced the results. FR and EV results suggest that 36 h is the time of sperm viability in sow genital tract. There was a strong decline of AS between T3 and T4.

O intervalo ideal entre a AI e ovulação (OV) não está bem determinado ainda, variando entre 12 a 28 h antes até 4 h depois da ovulação. A utilização de gonadotrofinas para sincronizar ovulação permitiria a pré-determinação do tamanho dos grupos, de acordo com os intervalos IA-OV, e possibilitaria determinar um intervalo seguro entre IA-OV 120 porcas receberam 7.5 mg IM de Luprostiol, entre os dias 12 e 17 do ciclo estral, 600 lU de eCG 1M 24 h após o Luprostiol e 5.0 mg de LH 1M 72 h após a injeção de eCG. O momento de ovulação foi diagnosticado pela ultra-sonografia trans-retal a intervalos de 6 h. Definiu-se 5 tratamentos de acordo com o intervalo IA-OV: T1 - 48 a 36 h antes da OV; T2 - 36 a 24 h antes da OV; T3 - 24 a 12 h antes da OV; T4 -12 a 0 h antes da OV e T5 - 0 a 12 h após a OV. O abate ocorreu 96.7±11.37 h após a OV. A taxa de recuperação (RR), número de lutea de corpos (NC), número total de estruturas (ST), taxa de fecundação (FR), viabilidade embrionária (EV) e número de espermatozóides acessórios (AS) foram analisados. O protocolo de sincronização mostrou uma distribuição homogênea dos animais entre os tratamentos (intervalo LH-OV de 39.22±7.6h), e não influenciou os resultados. A FR e os resultados de EV sugerem que 36 h seja o tempo de viabilidade do espermatozóide trato genital da porca. Houve um forte declínio do AS entre T3 e T4.

Seasonal variation in the endocrine-testicular function of captive jaguars (Panthera onca).

Captive adult male jaguars (Panthera onca) from two locations in southeast Brazil were studied to evaluate the effects of season on endocrine and testicular function. For assessment of testicular steroidogenic activity, androgen metabolite concentrations were measured in fecal samples collected one to three times per week over 14 ( n=14 ), 9 ( n=1 ) or 7 months ( n=1 ). To assess seasonality, data were grouped by season (summer: December-February; autumn: March-May; winter: June-August; spring: September-November). Additionally, samples collected in the dry season (March-August) were compared with those collected in the wet season (September-February). There were no differences ( P>0.05 ) in fecal androgen concentrations in samples collected in spring, summer, autumn, and winter ( 480.8+/-50.4 ng/g, 486.4+/-42.0 ng/g, 335.4+/-37.7 ng/g, and 418.6+/-40.4 ng/g dry feces). However, there were differences ( P<0.05 ) in fecal androgen concentrations between the dry and wet seasons ( 380.5+/-28.0 ng/g versus 483.9+/-32.3 ng/g dry feces). Sperm samples, collected from all males twice (approximately 6 months apart) were similar; mean (+/-S.E.M.) motility, concentration and morphology were 57.0 %4.5%, 6.3+/-2.4 x 10(6) ml(-1), and 60.8+/-3.1 %, respectively. In conclusion, androgen metabolite concentrations in the captive male jaguar were not affected by season, but there was a difference between the wet and dry periods. Further research is needed to verify these results.

Evaluation of synchronization of ovulation for fixed timed insemination in buffalo (Bubalus bubalis)

O objetivo desse estudo foi avaliar eficiência do protocolo de sincronização da ovulação (GnRH/PGF2alfa/GnRH) para inseminação artificial em tempo fixo em bubalinos. No Experimento 1, trinta e três búfalas com 60 dias pós-parto, foram separadas em dois grupos para avaliação da dinâmica folicular (Grupo 1, n = 16, 10mg de GnRH/15mg de PGF2alfa/10mg de GnRH; Grupo 2, n = 17, 20mg de GnRH/PGF2alfa/10mg de GnRH). Exames ultra-sonográficos foram realizados de 12 em 12 horas para verificar a resposta ovariana à primeira aplicação de GnRH. Outras avaliações foram realizadas nos dias da aplicação da PGF2alfa e do segundo GnRH. Em seguida, foram realizados exames de 6 em 6 horas até o momento da ovulação. Foram colhidas amostras de sangue nos dias das aplicações para avaliar as concentrações de progesterona no momento das administrações hormonais. No Experimento 2, foi verificada a eficiência da sincronização da ovulação para inseminação artificial em tempo fixo (16 horas após o segunda dose de GnRH, n=1053), durante as estações reprodutiva favorável e desfavorável, nos anos de 1998 e 1999. Os animais receberam 20mg de GnRH/PGF2alfa/10mg de GnRH. Ainda, foi analisada a influência da condição corporal, ordem de partos, período pós-parto ao início do tratamento, ano e a estação reprodutiva (favorável ou desfavorável), sobre a taxa de concepção. No Experimento 1, verificou-se que 33,0 ± 8,3h após a primeira aplicação de GnRH, 60,60 por cento dos animais ovularam (Grupo 1 = 70,5 vs. Grupo 2 = 50,00 por cento; P>0,05). A dose de GnRH (10mg vs. 20mg) e a concentração de progesterona no início do tratamento não interferiu na ovulação (P>0,05). Os animais que ovularam (n = 20) após a primeira aplicação de GnRH apresentaram maior diâmetro folicular (P<0,01) que aqueles que não ovularam (n=13). Na aplicação de PGF2alfa, o diâmetro folicular médio foi de 10,3 ± 2,0mm. O Grupo 1 apresentou maior diâmetro folicular que o Grupo 2 (P<0,01). Os animais que ovularam após a primeira aplicação de GnRH (n=20) apresentaram maiores concentrações de progesterona no dia da aplicação da PGF2alfa (P<0,05). Notou-se que 78,80 por cento dos animais tratados apresentaram ovulação sincronizada sendo que, a primeira dose de GnRH não interferiu na eficiência do protocolo (P>0,05). No Experimento 2, observou-se taxa de concepção de 45,40 por cento (n = 1053). Animais sincronizados durante a estação reprodutiva favorável apresentaram melhores taxas de concepção quando comparados ao período...

Citologia aspirativa por agulha fina (CAAF), em testículo de onça pintada (Panthera onca), utilizada como ferramenta no diagnóstico de infertilidade / Testicular fine needle aspiration cytology as a diagnostic tool in jaguar (Panthera onca) infertility

Técnicas de biópsia, caracterizadas pela remoção de segmentos de órgãos e tecidos para análise histopatológica, não são indicadas no auxílio diagnóstico de alterações testiculares para animais ameaçados de extinção, por não serem totalmente isentas de riscos. Neste sentido, é de grande interesse que se desenvolvam técnicas de biópsia testicular cada vez mais seguras e com o mínimo de conseqüências negativas. Com este intuito três onças pintadas (Panthera onca) foram submetidas a exames de Citologia Aspirativa por Agulha Fina (CAAF). Amostras foram obtidas através da punção aspirativa dos testículos, esfregaços foram confeccionados, corados com Panótico e analisados sob Microscopia Optica. Simultaneamente foram realizadas coletas de sêmen para avaliação do volume, pH, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermáticas. Quanto à avaliação espermática, os animais apresentaram valores semelhantes aos encontrados na literatura quanto ao volume, pH, motilidade, vigor e morfologia espermáticas. Quanto a concentração espermática os animais apresentaram valores abaixo dos encontrados na literatura. Nos exames de CAAF, todas as gerações de células germinativas foram identificadas, indicando espermatogênese normal em todos os animais, com exceção das espermátides finais duplas que ainda não foram relatadas como achados em punções testiculares de outras espécies, o que vem confirmar a elevada porcentagem de células teratológicas encontradas nesses animais. Desta forma, podemos concluir que a CAAF testicular é um método diagnóstico auxiliar importante na detecção de alterações testiculares em casos de sub ou infertilidade, podendo ser utilizados na rotina de investigação do trato reprodutivo masculino, quando o exame histopatológico, por ser um método altamente invasivo, é desaconselhável

Analysis of some normal parameters of the spermiogram of captive capuchin monkeys (Cebus apella Linnaeus, 1758 )

Nine adult males of capuchin monkey (Cebus apella) were electro-ejaculated with a rectal bipolar probe under general anaesthesia with tiletamine -zolazepan association. From the obtained ejaculate, we only analysed the liquid fraction in order to avoid any kind of chemical treatment to attain dissolution of the seminal coagulum. The mean obtained volume was 0,2ml with the sperm concentration of 56.169 x 10(6) sperm/ml and mean motility 68,4 percent and vigor 2,6. The mean percentage of morphologic normal spermatozoa was 39 percent. The technique was efficient for semen collection in Cebus apella and allowed seminal evaluation without possible sperm lesions caused by chemical treatment for coagulum dissolution

Biometria testicular de touros Nelore (Bos taurus indicus) e touros cruzados Nelore-europeu (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus) aos 20 e 24 meses de idade / Testicular biometry of Nellore (Bos taurus indicus) and crossbred bulls (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus) at 20 and 24 months of age

O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da idade, do grupo genético e da interaçäo entre idade e grupo genético, sobre as biometrias testiculares (circunferência escrotal e consistência testicular) Foram avaliados, aos 20 e 24 meses de idade, 190 touros Nelore e 447 touros cruzados Nelore-europeu. Aos 24 meses os exames foram repetidos. A circunferência escrotal e a consistência testicular foram influenciadas pelo grupo genético, idade e interaçäo grupo genético x idade. Foram encontradas maiores médias de circunferência escrotal e menores de consistência testicular em cruzados que em Nelore, tanto aos 20 quanto aos 24 meses. Correlaçöes entre circunferência escrotal As correlaçöes entre circunferência escrotal e idade, observadas no presente experimento, foram baixas para os touros Nelore aos 20 meses e aos 24 meses assim como para os cruzados aos 20 meses e aos 24 meses, entretanto, as correlaçöes entre circunferência escrotal e peso corporal foram maiores. As correlaçöes entre consistência testicular e idade e entre consistência testicular e peso corporal foram baixas para a maioria dos cruzados, para os cruzados em conjunto e para os Nelores

Serum cortisol, lactate and creatinine concentrations in Thoroughbred fillies of different ages and states of training

Exercise can be defined as "normal stress" stimulating body functions. Some reports suggest lactate as a stimulator of cortisol levels, while creatinine varies according to the amount of muscle tissue. In the present study we investigated the relationship between creatinine, serum lactate concentration and cortisol levels in training horses. Twenty-three Thoroughbred fillies were used, divided into 3 groups according to age and training protocol: G1, 1-2 years of age (N=7) on pasture, G2, 2-3 years (N=9) starting to be mounted, and G3, 3-4 years (N=7) racing at the Jockey Club. Blood samples were collected weekly during a six-month period at about 1:00 p.m. while the animals were resting. Cortisol was quantified with a commercial kit (Coat-a Count®) and serum creatinine and lactate were evaluated with an autoanalyzer with commercial reagents. Data were evaluated using non-parametric statistical tests, with the level of significance set at P< 0.05. Cortisol concentrations were 149ª + 7, 126b + 6, and 101c + 5 nmol/l, lactate concentrations were 2.1ª + 0.1, 2.0ª + 0.1, and 1.75b + 0.1 mmol/l, and creatinine concentrations were 125ª + 2, 132ª + 2 145b + 3 mumol/l in G1, G2 and G3, respectively. Only G2 showed a low but significant positive correlation of cortisol with lactate and a negative correlation of cortisol with creatinine levels. It was possible to conclude that cortisol, lactate and creatinine varied during horse aging and physical conditioning. The decrease of cortisol concentration (G2) suggests that the better physical condition acquired during training led to the increase of creatinine concentration, possibly related to muscle mass. The lower cortisol and lactate concentrations observed in G3 animals may have been due to greater muscle mass inducing an increase in creatinine concentrations or changes in muscle fiber type during training

Avaliaçäo da capacidade de penetraçäo de sêmen congelado de onça pintada (Panthera onca) em oócitos heterólogos / Penetration assay of frozen jaguar (Panthera onca) sperm in heterologous oocytes

A aplicaçäo de técnicas de reproduçäo assistida em espécies selvagens ameaçadas de extinçäo surge como método alternativo com o intuito de minimizar a diminuiçäo da variabilidade genética das populaçöes. Com o objetivo de determinar a fertilidade de onças pintadas (Panthera onca) mantidas em cativeiro e avaliar a eficácia dos meios de capacitaçäo espermática, foi realizado o ensaio de penetraçäo em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Para a realizaçäo do experimento, foi utilizado sêmen congelado de 3 animais do Bosque dos Jequitibás, Campinas/SP. Foram testadas 3 técnicas: Percoll, Swim-up e Swim-up + 1 hora em estufa de CO2 a 38§C, considerando como oócitos penetrados aqueles que apresentaram no seu interior a descondensaçäo da cabeça do espermatozóide. A média de penetraçöes da técnica Percoll (26,5 por cento) foi significativamente maior comparada à técnica Swim-up (8,1 por cento), sendo que näo houve penetraçäo utilizando a técnica Swim-up + 1 hora em estufa de CO2 a 38ºC (x2 = 19,93; p < 0,05). Analisando os resultados, concluímos que as técnicas Percoll e Swim-up foram eficientes para a realizaçäo do ensaio de penetraçäo, comprovando a capacidade de penetraçäo dos espermatozóides de onças pintadas (Panthera onca), pós-descongelamento, em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Porém, houve uma baixa porcentagem de penetraçäo, a qual pode estar associada ao elevado índice de espermatozóides morfologicamente anormais. Mais estudos devem ser conduzidos com a finalidade de avaliar a fertilidade destes animais e até que ponto a variabilidade da espécie pode estar comprometida

Animal Cytogenetics: some modifications in the peripheral blood lymphocyte culture technique

There is an increasing need for a close interaction between cytogenetics and veterinary practice, particularly in the detection of chromosomal abnormalities which may affect fertility and animal breeding programs in agriculture. This paper reports modifications of the standard lymphocyte culture technique frequently used for karyotyping. The main modifications included, a) the exclusion of antibiotics from the culture medium, b) the use of slow homogenization to avoid bubble formation, c) the use aluminium foil covered with self-adherent PVC film to seal the culture flasks and d) incubation at 39-40§C. Blood from cattle, buffaloes, dogs and monkeys was collected into heparinized syringes and inoculated into 199 medium, containing fetal calf serum and phytohemagglutinin. After incubation at 39-40§C for 72 h, the cells were exposed to colchicine and hypotonic solution followed by fixation on slides and staining with 3 per cent Giemsa stain. A total of 1000 nuclei and 13 good quality metaphases were counted and analyzed, respectively, for each animal. The mitotic index for the different species was 5.1ñ1.0 per cent for cattle, 5.5ñ0.9 per cent for buffaloes, 2.6ñ1.1 per cent for dogs and 6.0ñ0.7 per cent for monkeys. With the modifications described, marked cell growth, good metaphase quality, and better chromosome visualization were obtained.

Interrupçäo eletiva da gestaçäo em cäes (Canis familiaris, Linnaeus, 1758) / Elective interruption of pregnancy in dogs (Canis familiaris, Linnaeus, 1758)

Analisou-se a problemática da escolha de um método confiável e seguro para a interrupçäo eletiva da gestaçäo em cadelas, prática comum em clínica de pequenos animais para a prevençäo do nascimento de ninhadas indesejadas e fator importante näo só na soluçäo de problemas pessoais de proprietários, mas também no controle populacional da espécie. Foram abordados os aspectos favoráveis e contra-indicaçöes da interrupçäo cirúrgica e medicamentosa da prenhez. A interrupçäo cirúrgica é considerada a melhor escolha para animais que nao se pretenda utilizar para reproduçäo. A utilizaçäo de estrógenos, do citrato de tamoxifena e agentes embriotóxicos näo-hormonais é restringida pelos seus graves efeitos colaterais. A epostana necessita maiores estudos para confirmar sua eficiência. Apesar de possível, o uso dos análogos de GnRH esbarra em limitaçöes de fornecimento e custo, assim como o controle imunológico da gestaçäo, na especificidade dos agentes utilizados e possíveis efeitos colaterais, enquanto o uso de glicocorticóides, na duraçäo do tratamento e efeitos secundários inerentes aos corticosteróides. Mifepristona e aglepristona, indisponíveis no mercado, têm sido apontadas como drogas de futuro promissor em face de sua eficácia, segurança e utilizaçäo em qualquer fase da gestaçäo. Apesar dos seus previsíveis efeitos colaterais e da necessidade de hospitalizaçäo dos animais tratados, as prostaglandinas säo cada vez mais utilizadas como drogas abortivas. Dentre os agonistas de dopamina, a cabergolina mostra os melhores resultados, principalmente quando associada ao análogo da prostaglandina cloprostenol, podendo ser utilizada assim que o diagnóstico de gestaçäo seja possível, com eficiência de 100 por cento e poucos efeitos colaterais

Gonadal function arrest in fillies after birth, as reflected by steroid serum concentrations

Sexual maturation involves restraint of gonadal activity from birth to puberty, while somatic development continues. Fetal gonadal steroidogenesis is very important for the maintenance of pregnancy and foaling in mares. The present study was conducted to evaluate gonadal steroid serum levels in foals after birth. Five fillies born at Equília Stud Farm, Avaré, SP, Brazil, were studied. Blood samples were collected daily in the morning during the first week of life. Progesterone serum levels were measured by a commercial radioimmunoassay (RIA) kit and estradiol serum levels with a sensitized non-commercial RIA. At birth, both progesterone and estradiol serum levels were high (13.46 ñ 5.5 nmol/l and 7.95 ñ 1.5 nmol/l) and decreased to undetectable levels at the end of the first week of life. A negative correlation was found between fillie age and gonadal serum steroid concentration. Results show that fetal gonadal activity persists until birth, and decreases gradual and slowly during the first week of life, as reflected by steroid concentrations in the blood

Reproductive characteristics of captive male jaguars (Panthera onca)

Ejaculate traits, testicular volume and plasma testosterone levels were determined once every two months for one year in 4 adult male jaguars (Panthera onca) housed at the Säo Paulo Zoo, SP, Brazil. Semen samples was collected by electroejaculation and analyzed for pH, total volume, motility (0-100 per cent), status (0-5), total spermatozoa count and morphology. Blood samples was obtained by cephalic venipuncture immediately before the onset of electroejaculation and stored at -20§C until assay of testosterone by RIA. Using a calliper, the length and width of each testis was measured and the values were combined to determine the testicular volume. Semen analyses demonstrated a high percentage of structurally abnormal sperm (mean = 51 per cent) and low rates of motility (50.6 per cent) and status (2.2). No correlation was found between semen traits, plasma testosterone and testicular volume (Spearman's test). No season variation was detected throughout the year for semen traits, plasma testosterone and testicular volume (p>0.05, Friedman's test). The results of this study suggest that the captive jaguars in Brazil are not seasonal, and that semen collections can be performed throughout the year without a perturbation in overall ejaculate quality. However, underlying causes of high percentages of structurally abnormal sperm, found in captive jaguars, need to be investigated mainly to improve semen quality

Avaliaçäo de sêmen congelado de bovinos. Provas lenta e rápida de termo-resistência: efeitos sobre a fertilidade / Evaluation of frozen bull semen. Quick and slow thermoresistance tests: effects on fertility

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a eficiência de sêmen congelado, submetido às provas rápida (45 §C/1 hora) e lenta (38 §C/5 horas) de termo-resistência, sobre a fertilidade de fêmeas da espécie bovina. Cento e dezenove vacas foram selecionadas e divididas em 2 tratamentos. No tratamento 1 foram incluídos 6 grupos de 10 fêmeas, inseminadas com material cuja análise laboratorial revelou motilidade espermática progressiva superior ou igual a 20//, na prova rápida e valor menor a 20//na prova lenta. O tratamento 2 (controle) utilizou 59 vacas distribuídas em 5 grupos de 10 e um grupo de 9, inseminadas com material que, na prova lenta, apresentou 20//de motilidade espermática progressiva e qualquer valor na prova rápida. Apenas uma palheta foi utilizada por estro, tolerando-se até 3 repetiçöes de cio. O diagnóstico de gestaçäo foi realizado por palpaçäo retal, cerca de 60 dias após a última inseminaçäo artificial. Resultados satisfatórios foram alcançados nas taxas de prenhez (TTR/R = 0,793 ñ 0,05 e TTR/L = 0,875 ñ 0,05), näo havendo diferença estatística (P>0,05) quanto ao tipo de provas do termo-resistência. Näo houve diferença significativa (P>0,05) de prenhez de fêmeas inseminadas com material submetido ao teste de termo-resistência rápido, quando a motilidade espermática variou de 20 a 50//